微生物限度檢查儀操作流程

實驗前：

　　1.對實驗器皿的準備：對玻璃器皿進行清洗，將洗凈干燥的平皿、乳缽、刻度吸管等用牛皮紙包裹，放入鼓風干燥箱中于160℃干熱滅菌2小時或放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用。

　　2.對實驗用培養基及稀釋液的準備：按規定比例配制實驗所需的各種培養基及稀釋液，包好，放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用。

　　3.潔凈服的準備：將當天實驗所用潔凈服放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用。
實驗中：

　　1.將實驗所需器皿、培養基、潔凈服、樣品、稀釋液放入相應的傳遞窗中，打開紫外燈，照射30分鐘。

　　2.打開潔凈室的通風設備1小時以上，觀察潔凈室各個規定區域的壓差是否符合相應規定范圍，若不符合，則應通知設備部門及時進行調整。

　　3.進入潔凈室，換上工作鞋，用洗手液洗手，烘干，換上潔凈服，戴上口罩、手套，并與噴手器下用75%乙醇或0.1%新潔爾滅對雙手進行消毒。

　　4.進入萬級潔凈走廊，觀察各個規定房間的溫度、濕度、壓差是否符合規定，并與傳遞窗中將經紫外燈照射后的樣品、器皿稀釋液及培養基，放入相應的實驗室(如微生物限度檢查室或無菌檢查室)。并將培養基的溫度控制在45℃以下(若培養基出現凝固現象時，因微波爐加熱融化;若溫度太高時，則應用純化水降溫至不燙手背宜。
5.打開超凈工作臺的紫外燈，照射30分鐘，然后再打開超凈工作臺的通風設備。用75%乙醇或0.1%新潔爾滅對實驗所用工作臺面進行擦拭消毒(消毒時應遵循由里到外，由上到下，由潔凈要求高到潔凈要求低的原則)。

　　6.按照適宜的次序于超凈工作臺內擺放好稀釋液、天平、消毒液、集菌儀、剪刀、鑷子等物品，用75%酒精棉球進行消毒，將樣品內包裝表面用碘酒棉球以及75%酒精棉球依次進行消毒。將營養瓊脂平板與超凈工作臺的左、中、右各置一個(平板需經下預培養48小時且無菌生長)，開蓋暴露30min，測定的沉降菌每平板不得超過1cfu，則符合百級超凈工作臺的沉降菌標準(注：在潔凈工作臺進行操作時，為防止污染，應用酒精棉球對雙手反復消毒)。

　　7.樣品處理(以采用離心薄膜過濾法為例)：　用天平稱取規定量的樣品，置于乳缽中，碾碎，少量幾次加入規定量(用滅好菌的兩頭高量取)的稀釋液，研磨均勻，以制備供試液。8.細菌的檢查：用滅菌吸管吸取規定量的供試液于離心管中，500轉/秒，離心3分鐘。離心后用注射器吸取規定量的上清液于集菌儀中(集菌儀中的濾膜應事先用少量的蛋白胨溶液進行潤洗)，再用規定量的蛋白胨溶液進行反復沖洗(每次沖洗量不得超過100ml，每張濾膜的總的沖洗量不得超過1000ml，且沖洗過程中應該保持濾膜的完整性)。并用等量的蛋白胨溶液制備陰性對照的濾膜。